医療用試験紙キットの製造：HPキットサンプルの要件を一緒にチェックしてみましょう

公開日時：

2024-01-23 23:00

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医療用試験紙キットの製造：HPキットのサンプルに関する要件を一緒に確認しましょう。HPキットには、二重抗原を利用したワンステップ保温ウォールプレート法による酵素免疫吸着検査（ELISA）が採用されています。まず、事前にピロリ菌（HP）捕捉用抗原がコーティングされたマイクロプレートに、サンプルと標準物質、さらにHRP標識検出抗体を順次加え、温育後、完全に洗浄します。その後、リン酸化TMBで発色させると、過酸化酵素の作用により深青色に変わり、さらに酸の作用で最終的に淡黄色に変化します。この色の濃さは、試料中のピロリ菌（HP）の量と正比例関係にあります。最後に、450nmの波長で測定器を用いてOD値（吸光度値）を測定し、試料中の濃度を算出します。医療用試験紙キットの製造：HPキットのサンプル処理とその要件 1. 血清タンパク質：血清タンパク質分離管に採取した全血サンプルを室温で2時間放置するか、または4℃で一晩寝かせた後、1000×gで20分間遠心分離し、上澄み液を取り出します。なお、上澄み液は-20℃または-80℃で保存可能ですが、できるだけ繰り返しの凍結融解を避けるようご注意ください。 2. 血液：サンプル採取時には、EDTAまたはヘパリンを抗凝固剤として使用し、採取後30分以内に2～8℃で1000×gで15分間遠心分離してください。

　　医療用試験紙キットの製造：HPキットのサンプル要件を一緒に見ていきましょう

　　HPキットは、二重抗原を用いたワンステップ保温ウォールプレート法の酵素免疫吸着検査（ELISA）を採用しています。まず、事前にヘリコバクター・ピロリ（HP）捕捉抗原がコーティングされたマイクロプレートに試料を加え、続いて標準物質、さらにHRP標識検出抗体を順次追加します。その後、温育し、完全に洗浄を行います。次に、リン酸化TMBを用いて染色すると、過酸化酵素の作用によりTMBが濃い青色に変換され、さらに酸の作用で最終的に淡黄色に変わります。この色調の濃さは、試料中のヘリコバクター・ピロリ（HP）の量と正比例します。最後に、450nmの波長でオプトデンシティ値（OD値）を測定器を用いて計測し、試料中の濃度を算出します。

　　医療用試験紙キットの製造：HPキットのサンプル対応と要件

　　1. 血清タンパク質：血清タンパク質分離用チューブに採取した全血液検体を室温で2時間、または4℃で一晩放置した後、1000×gで20分間遠心分離し、上澄み液を採取します。また、上澄み液は-20℃または-80℃で保存可能ですが、できるだけ凍結融解を繰り返さないようにしてください。

　　2. 血液：抗凝固剤としてEDTAまたはヘパリンを用いて検体を採取し、採取後30分以内に2～8℃、1000×g条件下で15分間遠心分離した後、上澄み液を採取して検査を行います。また、上澄み液は-20℃または-80℃で保存可能ですが、できるだけ反復凍結融解を避けるようご注意ください。

　　3. 機関のホモジナイズ：急冷したPBS（0.01M、pH=7.4）で機関を洗浄し、残留血液を完全に除去します（ホモジナイズ中に熱分解した血球が測定値に影響を与えるため）。次に、重量を計った後、機関を切り取ります。切り取った部位に、対応する体積のPBSを加えます（一般的には重量体積比1:9で、例えば1gの部位サンプルに対して9mLのPBSを使用します。実際の体積は試験の必要に応じて適宜調整し、十分な確認を行ってください）。さらに、PBSにプロテアーゼ阻害剤を加えることを強く推奨します。その後、この混合物を中空ガラスホモジナイザーに入れ、氷上で十分に砕きます。細胞のさらなる破壊を目的として、ホモジネート液に超音波処理を施したり、繰り返し凍結融解を行ったりすることも可能です。*最後に、ホモジネート液を5000×gで5～10分間遠心分離し、上澄みを採取して検査します。

　　医療用試験紙キットの製造：キットの構成構造

　　検査成分や薬物残留、ウイルス種類などの化学薬品を収めるための小型ボックスがキットです。一般的には病院や製薬企業で利用されています。完全なELISAキットには、以下の各成分が含まれています：

　　(1) 抗原または抗原を被覆した固相担体（免疫吸収剤）;

　　(2) 酵素標識抗体または抗原（合成体）;

　　(3) 酵素活性リン酸化;

　　(4) 陰性対照品および陽性対照品（判定測定時）、基準物質とコントロール血清タンパク質を参照（定量分析測定時）;

　　(5) 合成体およびサンプルの封入液；

　　(6) 平板型ELISAでは一般的に、洗浄液として0.05% Tween 20を含む硫酸アンモニウム緩衝生理食塩水が使用されます。

　　(7) 酵素反応の停止液として一般的なHRP反応の停止液は塩酸であり、その濃度値は添加量および比色測定時の最終容積によって異なりますが、プレート型ELISAでは通常2mol/Lが用いられます。

　　医療用試験紙キットの製造：上記の説明がお役に立てば幸いです。医療用の試験紙やキットをお求めの際は、ぜひ当社までお問い合わせください。

医療用試験紙キットの製造

2022